Obsah

• Lepšie prezeranie
• Identifikácia a klasifikácia
• Detekcia uskutočniteľnosti
• Identifikácia bunkových štruktúr

Mikrobiológovia študujú pomocou mikroskopu vlastnosti mikroorganizmov, ako sú riasy, baktérie, prvoky, huby a vírusy. Aj keď sú niektoré organizmy, ako napríklad prvoky a bunky kvasiniek, dobre viditeľné cez podložné sklíčka, bakteriálne bunky vyžadujú zafarbenie. Vedci vyvinuli niekoľko metód, ako napríklad Gramovu farbiacu techniku, farbenie odolné voči kyselinám a fluorescenčné farbenie, aby sa zlepšila vizualizácia bakteriálnych buniek a bunkových štruktúr. Pomocou takýchto metód farbenia je možné identifikovať štrukturálne charakteristiky, ktoré pomáhajú klasifikovať baktérie.

Lepšie prezeranie

Bakteriálne organizmy sú také malé, že väčšina z nich je viditeľná iba pod mikroskopom so silou zväčšenia 1 000-krát. Jednoduché zväčšenie veľkosti však neposkytuje dostatočný stupeň čírosti, preto musia byť baktérie pred pozorovaním zafarbené, aby bola zaistená čírosť nevyhnutná na vizualizáciu.

Identifikácia a klasifikácia

Farbenie baktérií na rozlíšenie medzi rôznymi typmi baktérií sa nazýva diferenciálne farbenie. Gramovo zafarbenie je diferenciálne zafarbenie, ktoré rozlišuje baktérie v závislosti od obsahu bunkovej steny. Pri tejto metóde reagujú bakteriálne bunky s kryštálovo fialovým farbivom na fialové. Pridaním bielidla niektoré bakteriálne bunky stratia svoju farbu, zatiaľ čo iné nie. Pridaním farbiva safranínu sa zafarbené bunky začervenajú, zatiaľ čo bakteriálne bunky, ktoré nestrácajú farbu, zostávajú fialové. Bunky, ktoré sčervenajú, sa nazývajú gramnegatívne organizmy a bunky, ktoré nesčervenajú, sa klasifikujú ako grampozitívne organizmy. Technika Gramovho farbenia poskytuje rýchlu metódu na počiatočnú identifikáciu baktérií podieľajúcich sa na infekciách. Rovnako tak proces farbenia odolný voči kyselinám pomáha špecificky identifikovať organizmy patriace do triedy baktérií nazývaných mykobaktérie, ako je Mycobacterium tuberculosis.

Detekcia uskutočniteľnosti

Vo vzorkách bakteriálnych kultúr je často dôležité zistiť prítomnosť živých bakteriálnych buniek. Metódy ako fluorescenčné farbenie pomáhajú zistiť, či sú kultivačné bunky životaschopné alebo nie. Živé baktérie majú schopnosť prevádzať tetrazólium 5-kyano-2,3-ditolylchlorid (CTC) na farbivo, ktoré vykazuje červenú fluorescenciu. Preto keď kultúry sfarbené podľa CTC emitujú tieto fluorescencie, naznačuje to prítomnosť životaschopných baktérií. Propidium jodid je škvrna, ktorá pôsobí iba na neživé bunky, ktoré majú poškodené membrány, a je preto užitočná pri identifikácii mŕtvych bakteriálnych buniek.

Identifikácia bunkových štruktúr

Farbenie poskytuje metódu jasnej vizualizácie rôznych bunkových štruktúr. Napríklad metóda farbenia Feulgenom umožňuje identifikáciu jadra v bakteriálnych bunkách, zatiaľ čo farbenie Albertom je užitočné pri vizualizácii metachromatických granúl. Rovnako tak technika impregnácie striebrom umožňuje identifikáciu spirochét. Bičíky sú ľahko pozorovateľné, keď sú zafarbené Ryuovou farbou. Farbenie na malachitovej zeleni pomáha identifikovať bakteriálne spóry.