Obsah
Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je nástroj používaný na separáciu látok zo zmesi. K separácii a identifikácii určitých chemikálií dochádza hlavne v chromatografickej kolóne systému. Pre CLAE je k dispozícii veľa typov stĺpcov a každý z nich sa používa na konkrétny typ analýzy. Kolóna C18 je najsilnejšia nepolárna všeobecne používaná látka. Po nepretržitom dlhodobom používaní sa prietok rozpúšťadla zníži a čas analýzy sa predĺži. Ďalšou príčinou zníženia času na analýzu je získanie vzoriek, ktoré zanechávajú malé množstvo chemikálií v materiáli kolóny, čo znižuje schopnosť ich separácie. Obnovu jeho povrchu je možné vykonať ošetrením materiálu radom špecifických rozpúšťadiel, aby sa očistil od všetkých zostávajúcich vzoriek a revitalizoval sa podkladový materiál.
Krok 1
Odstráňte kolónu C18 zo smeru prúdenia a umiestnite ju do opačného smeru. Získanie rozpúšťadla späť ním zmierni akumulačný efekt, ktorý sa vyskytuje v priebehu času. Je potrebné dbať na to, aby na konci kolóny nezostalo príliš veľa materiálu. Niektoré továrne používajú väčšie sito v hornej časti, takže keď tok mení smer, sieťka je v polohe nižšie. Tento spôsob obnovy sa nazýva obrátenie toku. Aby ste zabránili nahromadeniu prietoku k detektoru systému a možnému vzniku prekážky, nechajte ho pracovať bez pripojeného detektora a nasmerujte tok zo kolóny na zneškodnenie.
Krok 2
Skúmavka na priechod rozpúšťadla sa umiestni do série rozpúšťadiel, aby sa vymyla akákoľvek zlúčenina zadržaná v kolóne v opačnom smere. Tieto rozpúšťadlá sa líšia svojimi hydrofilnými vlastnosťami. Ich obmenou budete eluovať zlúčeniny rovnako rozmanitej hydrofilnej povahy. Postupne sa použije 50 ml každého z nasledujúcich rozpúšťadiel: voda (ak používate tlmivý roztok), metanol, izopropanol, dichlórmetán, hexán, dichlórmetán a izopropanol.
Krok 3
Vymeňte kolónu správnym smerom a nechajte ním pretekať rozpúšťadlo. Pred pokračovaním ho umyte najmenej 75 ml. Vyskúšajte to pomocou vzoru, ktorý ste použili, keď bol nový, a skontrolujte výsledky. Venujte pozornosť dosiahnutiu maximálnych retenčných bodov a celkového času analýzy. Miera, do akej sa tieto atribúty zhodujú s pôvodným testom, keď bol ešte nový, bude ukazovať, do akej miery bol stĺpec obnovený. Ak výsledky nie sú uspokojivé, vymeňte stĺpec za nový a starý vyhoďte.
