Obsah
Studený alkohol sa používa na oddelenie DNA od roztokov na báze vody, čo umožňuje čistenie pre následné genetické testovanie. Pridanie alkoholu do roztoku obsahujúceho DNA je jednoduchý spôsob, ako ho čistiť pri nižších teplotách a spomaľovať enzýmy, ktoré ho degradujú, čo dáva lepšie výsledky extrakcie.
Rozbité steny
Extrakčné postupy na získanie čistej DNA sa musia zbaviť všetkých molekulárnych a chemických zložiek tkaniva, z ktorého sa DNA extrahuje. Prvé kroky zahŕňajú zničenie bunkových stien. Toto sa môže uskutočniť s rôznymi chemickými činidlami, ktoré sú žieravé pre bunkové membrány, ale nepoškodzujú DNA. Bunky môžu byť tiež sonikované, homogenizované alebo mleté, aby sa zničili membrány.
Odstránenie lipidov
Akonáhle sú bunkové steny zničené, pridá sa detergent, aby sa zbavili tukov a olejov, ktoré tvoria bunkové membrány. Čistiace prostriedky spôsobujú rozpúšťanie olejov a tukov v roztoku.
Odstránenie proteínov
Proteíny a enzýmy sa môžu štiepiť pridaním proteázy do roztoku. Proteázy rozkladajú proteíny na malé peptidy a aminokyseliny.
Precipitačná DNA
Pridanie ľadovo studeného alkoholu k roztoku vyzráža a agreguje DNA. Genetický materiál sa môže zbierať odstredením vzorky a dekantáciou kvapalnej vrstvy. Mal by existovať ako malý sediment na dne centrifugačnej skúmavky.
Čistiaca DNA
DNA môže byť premytá opätovným suspendovaním v studenom alkoholovom roztoku a opakovane centrifugovaná, aby sa získala veľmi čistá vzorka. Typické alkoholy zahŕňajú etanol a izopropanol. Tento proces zanecháva veľmi čistú vzorku v prísnych testoch.
