Obsah

• inštrukcia
• Obnovenie stĺpca
• tipy
• varovanie
• Čo potrebujete

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je bežnou metódou laboratórnej analýzy, pri ktorej sa vzorka separuje na svoje chemické zložky, keď prechádza kolónou. Táto kolóna je naplnená poréznym materiálom, typicky silikagélom. Štandardný stĺpec s reverznou fázou, ako je C8, môže niekedy upchať alebo kontaminovať. Tieto stĺpce možno získať pomocou veľmi jednoduchých techník.

inštrukcia

Správne rozpúšťadlo môže regenerovať znečistenú kolónu (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Obnovenie stĺpca

1. Odpojte kolónu a otočte jej polohu tak, aby mobilná fáza teraz vstupovala cez to, čo je normálne výstup kolóny. Na druhý koniec stĺpika (ktorý bol pôvodným vstupom) pripojte vývod a nechajte ho odtiecť do výpustu.

2. Čerpanie série rozpúšťadiel v poradí klesajúcej polarity. Odporúčaná základná séria je začať s metanolom, potom sa prepne na acetonitril, potom acetonitril / izopropanol (75:25), izopropanol, metylénchlorid a hexán. Ak sa mobilná fáza, ktorá bola v kolóne, absorbovala, odporúča sa prechod s vodou v metanole. Je postačujúci prietok 1 až 2 mililitre za minútu a približne 10 objemových stĺpcov každého rozpúšťadla by sa malo čerpať. Objemový stĺpec je vnútorný priestor kolóny a vypočíta sa (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), kde DI je vnútorný priemer kolóny a L je dĺžka.

   
   

3. Do kolóny sa prečerpá ďalších desať objemov izopropanolu, aby sa pripravila na použitie v pôvodnej mobilnej fáze. Ak bola pôvodná mobilná fáza odpružená, tiež prečerpajte vodu cez stĺpec po izopropanole pred návratom do pôvodnej mobilnej fázy.

4. Odpojte kolónu, otočte ju a znovu zaaretujte tak, aby bola v pôvodnej polohe (aby pohyblivá fáza vstúpila do pravej strany stĺpika). Znova pripojte výstup reproduktora k detektoru.

tipy

• Ak tento postup kolónu dôkladne nevyčistí, môže sa použiť zmes 50:50 dimetylsulfoxidu (DMSO) a dimetylformamidu (DMF). Zvyšky proteínov a kovových iónov môžu vyžadovať iné typy rozpúšťadiel, ako sú ióny šetriace činidlá alebo roztok kyseliny etyléndiamíntetraoctovej (EDTA).

varovanie

• V niektorých spotrebičoch bude mať chrbát hrubý kov ako sito. V tomto prípade vrátenie stĺpca umožní stacionárnej fáze opustiť stĺpec, čo sa neodporúča. Ak si nie ste istý, obráťte sa na svojho predajcu.
• Rozpúšťadlo použité v tomto procese je potenciálne toxické pri požití a vdýchnutí. Pri manipulácii používajte bežné laboratórne opatrenia.

Čo potrebujete

• HPLC zariadenie
• voda
• metanol
• acetonitril
• isopropanol
• Metylénchlorid
• hexán